由真菌(林伯氏白色念球菌,Tritirachium album Limber)产生的蛋白酶K,是一种枯草蛋白酶类的高活性,切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的一般降解。
将合成的蛋白酶K基因连接到黑曲霉表达载体上,将构建好的表达载体转入宿主黑曲霉中,使其表达蛋白酶K。挑选表达量最高的转化子通过酶学特性质研究,分析得到黑曲霉生产的蛋白酶K的最适温度和pH,最终选定海藻糖作为蛋白酶K的保护剂,有效地提高蛋白酶K在强碱条件下的酶活,蛋白酶K的酶活已达到>4000单位/毫升(福林法),蛋白量接近1克/升(蛋白质电泳胶),目前已经申请专利1项。用紫外诱变方法,经过两轮筛选得到了蛋白酶K表达量有明显提高的突变株,目前,突变株正在验证中,下一步准备纯化突变株发酵生产的蛋白酶K。