专利详情

专利名称	一种杀虫增效蛋白的制备方法及用途
申请号	CN201010268069.4	专利类型	发明专利
公开（公告）号	CN101942462A	公开（授权）日	2011.01.12
申请（专利权）人	中国科学院武汉病毒研究所	发明（设计）人	孙修炼;刘向阳
主分类号	C12N15/34(2006.01)I	IPC主分类号	C12N15/34(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C07K14/01(2006.01)I;A01N63/00(2006.01)I;A01N63/02(2006.01)I;A01P7/04(2006.01)I
专利有效期	一种杀虫增效蛋白的制备方法及用途至一种杀虫增效蛋白的制备方法及用途	法律状态	专利申请权、专利权的转移
说明书摘要	本发明公开了一种杀虫增效蛋白的制备方法及用途，其步骤：A）根据CpGVorf13的序列，设计引物，以CpGV基因组DNA为模板进行PCR扩增截短片段；B）PCR产物用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，用PCR回收纯化试剂盒回收PCR产物，与pMD18-T载体连接；C）提取质粒酶切鉴定阳性克隆子并测序，回收目的片断，亚克隆至表达载体pET-28a，为pET-28a-Cp13；D）将pET-28a-Cp13转化大肠杆菌DH5α，提取质粒鉴定，用质粒转化大肠杆菌BL21，加IPTG诱导表达；E）SDS-PAGE分析检测表达产物，得到Cp13蛋白。表达的Cp13蛋白可采用His纯化树脂Ni-NTA进行纯化。原核表达的Cp13能显著提高多种昆虫病毒和Bt药物的杀虫活性，破坏昆虫中肠围食膜的完整性。该增效蛋白使用方便，安全环保，无毒性无副作用。