专利详情

专利名称	突变型TNF-α基因和提高抗原TNF-α基因表达量的方法
申请号	CN201210572674.X	专利类型	发明专利
公开（公告）号	CN103898144A	公开（授权）日	2014.07.02
申请（专利权）人	深圳先进技术研究院	发明（设计）人	万晓春;李俊鑫;任晓虎;王蒲
主分类号	C12N15/70(2006.01)I	IPC主分类号	C12N15/70(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C07K14/56(2006.01)I
专利有效期	突变型TNF-α基因和提高抗原TNF-α基因表达量的方法至突变型TNF-α基因和提高抗原TNF-α基因表达量的方法	法律状态	实质审查的生效
说明书摘要	本发明公开了碱基组成如SEQ?ID?NO?7所示的突变型TNF-α基因和抗原TNF-α基因表达的方法，包括以下步骤：以人分泌型TNF-α基因cDNA克隆为模板，以引物SEQ?ID?NO?1和SEQ?ID?NO?2进行扩增，得到扩增产物T1；以引物SEQ?ID?NO?3和SEQ?ID?NO?4进行扩增，得到扩增产物T2；以扩增产物T1和T2为模板，以SEQ?ID?NO?1和SEQ?ID?NO?4为引物，进行重叠PCR扩增，得到突变型TNF-α基因；双酶切突变型TNF-α基因后，插入pET28a表达载体中，然后转化大肠杆菌；诱导培养，得到TNF-α蛋白。本发明将TNF-α基因中两对相距较近的大肠杆菌稀有密码子突变为大肠杆菌偏爱密码子，密码子优化后的TNF-α基因表达量提高了至少1.5倍。